技术原理

流式细胞技术（Flow Cytometry，FCM）        流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球、细菌、小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术，即在流动的状态中检测细胞或颗粒的各项特性，具有特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析的特点。                常规分析型流式细胞仪原理图 CytoFLEX系列 流式细胞仪，摈弃传统光电倍增管（PMT），采用固体、高效、低噪音光纤二极管阵列检测器（FAPD）设计而成的波分复用（WDM）检测模块，大幅提升仪器的灵敏度，使对稀有细胞和微颗粒的检测水平有了质的飞跃。 产品应用/特点   ·创新性设计，助推细胞研究 CytoFLEX平台 桌面型流式细胞仪系列，采用创新性的设计，将光学部件与流动室进行整合，最大限度降低光损失，带来无与伦比的激发与发射性能，实现更高信号分辨率下更为准确的数据采集。 CytoFLEX系列将持之以恒地充分发挥下列功能： ·卓越的灵敏度 ·采用台式分析仪实现微小粒子分析 ·可扩展的插拔式带通滤光片套件 ·扩展性强，升级灵活 ·软件直观，便于多色分析   CytoFLEX系列可轻松完成实验： ·活力检测 ·细胞增殖 ·细胞周期分析 ·细胞凋亡 ·DNA分析 ·细菌、酵母和藻类分析 ·细胞绝对计数   ·专注科研，按实验需求配置系统 CytoFLEX流式细胞仪系列，提供易于使用的系统和完备的性能，使用户专注于科研本身，省去对于仪器及软件操作的培训过程。用户可以按照实验室需求配置系统，无论是复杂程度低或高的常规分析，还是推动流式细胞术发展的前沿实验，都可以在该系统上开展。   例：以13色免疫表型分析法分析人外周血中的T细胞亚群 （实验设计基于细胞表面分子差异表达的分析方法，利用多个标记来捕捉不同的T细胞亚群。实验过程中，使用红外激光通道可添加死活细胞分析，解放出其他通道，用于典型的细胞表面标记物分析；同时，红外激光通道可以降低相对明亮的CD8标记物的补偿需求，保持对弱阳性结果检测的灵敏度。） ·波分复用与集成光路，打造高灵敏度性能 CytoFLEX 平台系列产品，借助电信行业技术，采用波分复用（WDM）检测模块，依靠光纤和带通滤光片，将多种波长的光信号分开进行测量，无需使用多个二向色滤光片引导光路，与传统仪器相比，更容易配置荧光通道，且能够在最大程度上减少折射而提高光效率。 此外，系统使用集成式光学系统，将光源聚焦到流动池上，实现高效的光路管理，获得对于荧光标记细胞的最佳激发和发射效果，数据可呈现出对弱阳性信号的强大鉴别，以及阴性和阳性信号的精准区分。   例：SPHEROTM 8峰彩虹校准微球检测结果 （上：蓝光通道；中：红光通道；下：紫光通道。由八峰彩虹微球在CytoFLEX各个通道中的检测结果可知，CytoFLEX系列不仅在常用的检测通道中有卓越的灵敏度表现，在紫光和远红外通道方面也表现突出。） 例：对低水平表达的调节性T细胞的鉴定 （无需进行荧光扣除对照染色，即可对稀有的FoxP3+调节性T细胞群进行测定） ·紫光侧向散射功能，检测可至纳米级别 任何粒子所散射的光量与粒子直径成正比，与用于检测它的光波长成反比。因此，波长较小的紫光（405nm）和蓝光（488nm）在任何粒径条件下产生的直角光散射多于其他光；此外，光波进入不同折射率的介质而被折射时，折射角与光波长成反比，波长越小，折射角越大。 根据上述物理特性，CytoFLEX平台配备了触发紫光和蓝光侧向角散射光的功能，这种灵活性增大了粒子的检测和分析范围。在微颗粒（如外泌体、微囊泡和二氧化硅纳米粒子）的检测应用中，CytoFLEX产品可展现出强大实力，其检测大小极限可低至200nm。   例：纳米微颗粒检测 （使用前向散射和侧向散射光参数分辨不同大小的微球颗粒） ·检测线性与智能补偿，结果准确且可重复 由于设备中半导体的生产工艺具有极高的一致性，使得CytoFLEX平台测得的荧光强度与相应的检测器增益值具有很好的线性度。由多个单次增益设定值获得的补偿矩阵可以相互混合，形成全矩阵，即补偿库。补偿库存储荧光染料的补偿矩阵溢出值，建立智能补偿库，当增益值改变，智能补偿库自动调节并确定正确的补偿矩阵，对光路进行校正，保持仪器稳定性，使用户轻松获得准确和可重复性的结果，从容应对多色分析任务。   例：补偿库存储荧光染料的补偿矩阵溢出值 ·数据获取和分析软件，轻松上手易学易用 CytoFLEX平台产品配套的CytExpert软件易学易用，对于任何水平的流式使用者——无论是新手还是经验丰富的流式细胞仪操作者，均能快速掌握和运行操作，根据实验便捷自如地设置方案，获得符合发表需求的优质数据。   CytExpert特点包括： ·补偿实验配置可在数据收集后进行修改 ·补偿实验可使用多种样本类型（微球/细胞） ·线性增益（电压），对改变的增益设置自动修改，无需手动调整补偿 ·直观的GUI手形工具可轻松调整细胞仪参数设置 ·自动设置阈值、激光间延迟 ·具有动态的坐标轴 ·无微球绝对计数 ·加载样本时可自动混合 ·EMF文件格式，具有批量处理功能 更新后的CytExpert 2.0 版本增加和完善了如下功能： ·每张叠加图显示多达10个样品 ·最高存储15个通道的2500万个events数据 ·散点图显示多达50万个events ·与Win7、Win8或Win10兼容     ·板孔进样模式，提高工作效率 CytoFLEX平台产品可配备板孔进样器，选择板孔进样器模式后，进样器系统可在32分钟内完成一块96孔板的分析，有效节省时间，提高工作效率。板孔进样模式的优点还包括： ·在5分钟内即可实现单管和采样板获取之间的切换 ·具有便捷的虚拟板布局，配备自定义清洗和混匀功能 ·可在单板上定义多个实验 ·与平底、U形底和V形底孔板兼容

耗材

滤光片 购置仪器时，即根据用户需要配备全套滤光片； 用户后期可根据需要自行切换，无需再购买额外的滤光片。

产品规格

·CytoFLEX流式细胞仪 CytoFLEX可提供传统的激光调色板和多个通道，从单激光四色至三激光十三色，满足大部分基本的流式细胞分析需求。 蓝-红-紫光（B-R-V）系列 CytoFLEX最高配置的仪器包括五个488nm（蓝色）荧光通道、三个638nm（红色）荧光通道和五个405nm（紫色）荧光通道。仪器本身包含13个带通滤光片，可以根据需要进行配置。用户可启用目前研究所需通道，随着研究的深入，后续可增加通道数量。 带通滤光片 450/45 585/42 660/10（2） 712/25 525/40（2） 610/20（2） 690/50 780/60（3） 可选配置 激光数 荧光通道 488NM（蓝光） 638NM（红光） 405NM（紫光） 3 13 5 3 5 3 12 5 3 4 3 12 4 3 5 3 11 4 3 4 3 11 3 3 5 3 10 4 3 3 3 10 5 3 2 2 10 5   5 3 10 5 3 2 3 9 3 3 3 3 9 4 3 2 2 8 5 3   3 8 3 3 2 3 8 4 2 2 3 7 3 2 2 2 6 3 3   2 6 4 2   2 6 3   3 2 6 4   2 3 6 2 2 2 1 5 5     2 5 3 2   1 4 4     2 4 3 1   2 4 2 2   2 4 2   2   CytoFLEX性能参数 最小上样体积 10μL 上样速度 30,000 events/s 校准方式 光路自动校准 软件 CytExpert采样与分析软件 动态数据显示范围 7个数量级 荧光灵敏度 FITC< 30 MESF，PE<10 MESF 信号收集系统 Clear Focus，可实现10-7到107的信号显示 信号处理精度 24 Bit 最小微粒检测值 200nm 激光器 50mW，全固态，高功率；非共线激发；具温控系统，即开即用 升级空间 最高可至三激光13色 最高单样本信息存储量 2500万个events数据 体积 40cm3，适配大部分生物安全柜 ·CytoFLEX S 流式细胞仪 CytoFLEX S型号配置四色激光，扩展了荧光染料调色板，可以满足用户特殊应用的需求。 蓝-红-紫-黄绿光（B-R-V-Y）系列 CytoFLEX S 该款最高配置的仪器包含两个488nm（蓝色）荧光通道、三个638nm（红色）荧光通道、四个405nm（紫色）荧光通道和四个561nm（黄绿色）荧光通道。 561nm黄色激光激发RFP及其衍生物（如DsRed、HcRed）的效率优于488nm蓝色激光。同时，激光空间分隔可提高灵敏度，最大程度地减少激光之间的补偿。因此，该款仪器可用于分析表达GFP、YFP、DsRed和HcRed的细胞，以高分辨率获得同时表达的多色荧光蛋白信号。 仪器本身包含13个带通滤光片，可以根据需要进行配置。用户可启用目前研究所需通道，随着研究的深入，后续可增加通道数量。 包括13个可复位的带通滤光片 450/45 585/42 660/10（2） 712/25 525/40（2） 610/20（2） 690/50（2） 780/60（2） 可选配置 激光数 荧光通道 488NM（蓝光） 638NM（红光） 405NM（紫光） 561NM（黄绿光） 4 13 2 3 4 4 3 10 2   4 4 3 9 2 3   4 4 9 2 2 2 3 3 9 2 3 4   2 6 2     4 3 6 2   2 2 蓝-红-紫-近紫外光（B-R-V-N）系列 CytoFLEX S 375 nm 激光是 CytoFLEX 系列桌面型流式细胞仪的新增选项。该款流式细胞仪可以同时检测15个参数，包括13个荧光参数。最高配置仪器包括488nm（蓝）激光：5个通道；638nm（红）激光：3个通道；405nm（紫）激光：3个通道；375nm（近紫外）激光：2个通道。该款细胞仪最低配备六个荧光通道，用户可在后期升级至更高参数配置。 新增的 375 nm 波长激光，在空间分离光束点中，能够实现对 Hoechst、DAPI 和亮紫外（BUV）染料的出色激发，确保在无需使用真正的紫外光的情况下，即可通过上述染料/荧光染料进行实验，避免相应的费用，降低研究成本。 包括13个可复位的带通滤光片 450/45（2） 585/42 660/10 690/50 780/60（2） 525/40（2） 610/20（2） 675/30 712/25   可选配置 激光数 荧光通道 488NM（蓝光） 638NM（红光） 405NM（紫光） 375NM（近紫外光） 4 13 5 3 3 2 3 10 5 3   2 2 6 4     2 蓝-红-紫-红外光（B-R-V-I）系列 CytoFLEX?S系列增加808nm激光后，可提供额外的荧光通道，不但可以用于细胞死活鉴定染料，也可以用于其光谱与传统通道重叠程度最小的高亮度荧光标记。 该款最高配置的仪器包含四个488nm（蓝色）荧光通道、三个638nm（红色）荧光通道、四个405nm（紫色）荧光通道和两个808nm（红外）荧光通道。 仪器本身包含13个带通滤光片，可以根据需要进行配置。用户可启用目前研究所需通道，随着研究的深入，后续可增加通道数量。 包括13个可复位的带通滤光片 450/45 585/42 660/10（2） 712/25 840/20 525/40（2） 610/20 690/50 763/43（2） 885/40   可选配置 激光数 荧光通道 488NM（蓝光） 638NM（红光） 405NM（紫光） 808NM（红外光） 4 13 4 3 4 2 3 10 4   4 2 3 9 4 3   2 2 6 4     2 CytoFLEX S性能参数 最小上样体积 10μL 检测速度（15个参数） 30,000 events/s 预设流速 10、30 或60 μL/min 进样方式 可配板式自动进样器 孔板兼容性 单管；平底、U 型和 V 型底标准 96 孔板 校准方式 光路自动校准 软件 CytExpert采样与分析软件 动态数据显示范围 7个数量级 荧光灵敏度 FITC< 30 MESF，PE<10 MESF 信号收集系统 Clear Focus，可实现10-7到107的信号显示 最小微粒检测值 200nm 激光器 50mW，全固态，高功率；非共线激发；具温控系统，即开即用 升级空间 最高可至四激光13色 重量 ＜22 kg 体积 40.6 cm x 40.5 cm x 33 cm，可安装在实验台面或标准生物安全柜内   ·CytoFLEX LX流式细胞仪 CytoFLEX LX型号配置六色激光，提供多达21个荧光通道，可以简化复杂实验，满足用户在相关研究领域的需求。 蓝-红-紫-黄绿-近紫外-红外光（B-R-V-Y-N-I）系列 CytoFLEX LX 该款流式细胞仪可同时检测23个参数，包括21个荧光参数。最高配置时，其不同波长激光的荧光通道数如下：488nm（蓝色）：3个；638nm（红色）：3个；405nm（紫色）：5个；561nm（黄绿色）：5个；375nm（近紫外）：3个；以及808nm（红外光）：2个。 仪器包括21个带通滤光片，可根据需要进行配置。用户可启用目前研究所需通道，随着研究的深入，后续可增加通道数量。 包括21个可复位的带通滤光片 450/45（2） 525/40（2） 525/45 585/42 610/20（3） 660/10（2） 675/30（2） 690/50 710/50 712/25 763/43（3） 840/20 885/40   可选配置 激光数 荧光通道 488NM（蓝光） 638NM（红光） 405NM（紫光） 561NM（黄绿光） 375NM （近紫外光） 808NM（红外光） 6 21 3 3 5 5 3 2 5 19 3 3 5 5 3     CytoFLEX LX性能参数 侧向散射光分辨率 蓝光（488nm）＜300nm；紫光（405nm）＜200nm 荧光灵敏度 FITC< 30 MESF，PE<10 MESF 检测速度（15个参数） 30,000 events/s 信号处理 全数字化系统，7个十进制数据显示 鞘液和样品传输 超低压蠕动泵 样品流速 固定流速：10、30及60μL/min 自定义流速控制：10-240μL/min，按1μL增量调节 板孔进样模式 96孔标准平底，U和V底板 动态数据显示范围 7个数量级 软件 CytExpert采样与分析软件 标准化校准 自动校准增益参数值 补偿 自动/手动全矩阵补偿 体积 60.5 cm x 73.3 cm x 45.1 cm 重量 79kg

参考文献

· Sheller S, Papaconstantinou J, UrrabazGarza R, Richardson L, Saade G, Salomon C, et al. (2016) Amnion-Epithelial-Cell-Derived Exosomes Demonstrate Physiologic State of Cell under Oxidative Stress.PLoS ONE 11(6): e0157614. doi:10.1371/journal.pone.0157614 · Noster R, de Koning HD, Maier E, Prelog M, Lainka E, Zielinski CE. (2016) Dysregulation of proinflammatory versus anti-inflammatory uman TH17 cell functionalities in the autoinflammatory Schnitzler syndrome.J Allergy Clin Immunol. 138(4): e6. doi: 10.1016/j.jaci.2015.12.1338 · Yunjia Ren, Li Hua, Xiuping Meng, Yue Xiao, Xu Hao, Sheng Guo, Peiyan Zhao, Luowei Wang, Boqi Dong, Yongli Yu, and Liying Wang. (2016) Correlation of Surface Toll-Like Receptor 9 Expression with IL-17 Production in Neutrophils during Septic Peritonitis in Mice Induced by E.coli.Mediators of Inflammation 2016: doi:10.1155/2016/3296307 · Wu, F., Zhao, Y., Jiao, T., Shi, D., Zhu, X., Zhang, M., Zhou, H. (2015). CXCR2 is essential for cerebral endothelial activation and leukocyte recruitment during neuroinflammation.Journal of Neuroinflammation, 12(98): http://doi.org/10.1186/s12974-015-0316-6 · Wisgrill, L., Lamm, C., Hartmann, J., PreiBing, F., Dragosits, K., Bee, A., et al. (2016) Peripheral blood microvesicles secretion is influenced by storage time, temperature, and anticoagulants. Cytometry A. 89 doi: 10.1002/cyto.a.22892 · C Maueroder, RA Chaurio, T Dumych, M Podolska, MD Lootsik, S Culemann, RP Friedrich, R Bilyy, C Alexiou, G Schett, C Berens, M Herrmann, and LE Munoz. (2016) A blast without power-cell death induced by the tuberculosis-necrotizing toxin fails to elicit adequate immune responses.Cell Death and Differentiation: doi: 10.1038/cdd.2016.4 · Gamperl H, Plattfaut C, Freund A, Quecke T, Theophil F, Gieseler F. (2016) Extracellular vesicles from malignant effusions induce tumor cell migration: inhibitory effect of LMWH tinzaparin.Cell Biol Int 40 (10): doi: 10.1002/cbin.10645 · Ge, Y., Liu, J., Zeng, M., He, J., Qin, P., Huang, H., & Xu, L. (2016) Identification of WOX Family Genes in Selaginella kraussiana?for Studies on Stem Cells and Regeneration in Lycophytes.Frontiers in Plant Science, 7, 93. http://doi.org/10.3389/fpls.2016.00093 · Boroda AV, Kipryushina YO, Yakovlev KV, Odintsova NA. (2016) The contribution of apoptosis and necrosis in freezing injury of sea urchin embryonic cells. Cryobiology 73(1) doi:10.1016/j. cryobiol. 2016.06.007 · Li, M., Shi, X., Guo, C., & Lin, S. (2016) Phosphorus Deficiency Inhibits Cell Division But Not Growth in the Dinoflagellate Amphidinium carterae. Frontiers in Microbiology, 7,826. http://doi.org.10.3389/fmicb.2016.00826

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